欢迎来到论文发表网

环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征

发布时间:2015-07-01 15:28

【摘要】:建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60min扩增反应。通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定。本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR(rRT-PCR)进行比较。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系。基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝。因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力。

【关键词】: 环介导逆转录等温扩增 中东呼吸综合征冠状病毒

【分类号】:R373;R440

【正文快照】:

中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respir-atory syndrome coronavirus,MERS-CoV)感染最早发现于一名60岁的沙特阿拉伯王国吉达市男性。他于2012年6月6日发病,7日后因重症肺炎住院治疗,随后发生急性肾衰竭并于2012年6月24日死亡。2012年10月,van Boheemen等[1]对该患者的痰

【相似文献】

1 李佳禾;李一婧;付萍;张跃伟;黄书林;郭盼盼;蒋菲;吴文学;;猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法的建立与应用[J];农业生物技术学报;2009年06期
2 匡燕云;李思光;罗玉萍;;环介导等温扩增核酸技术及其应用[J];微生物学通报;2007年03期
3 张仑;殷幼平;王中康;;环介导等温扩增技术的研究进展[J];贵州农业科学;2009年06期
4 陈红梅;程龙飞;施少华;傅光华;万春和;黄瑜;李宋钰;;鸭疫里默氏菌环介导等温扩增检测方法的建立[J];中国农学通报;2010年20期
5 吕恒;张锦海;陈凤娟;谭维国;顾海涛;王平;王长军;;大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增可视化检测方法的建立[J];中国病原生物学杂志;2013年04期
6 张跃伟;李旭妮;郭盼盼;付萍;李佳禾;黄书林;蒋菲;吴文学;;荧光显色在环介导等温扩增(LAMP)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的应用[J];农业生物技术学报;2010年03期
7 黄国亮;田浩;李志永;王同舟;罗贤波;马丽;王璨;邓涛;;痕量样品高灵敏度快速测量方法与便携式系统研究[J];光学学报;2012年02期
8 邝筱珊;胡松楠;游淑珠;成晓维;王小玉;冯家望;;食品和饲料中转基因植物FMV35S启动子环介导等温扩增检测方法的建立[J];安徽农业科学;2014年16期
9 吕恒;张锦海;陈凤娟;顾海涛;王平;王玉邦;王长军;;SARS冠状病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立[J];实用预防医学;2013年04期
10 ;[J];;年期

上一篇:抗坏血酸存在下离子色谱法直接测定尿液中草酸

下一篇:中国古代四学与中医思维渊源探识